DNA RNA の受託合成、プロテオーム受託解析、ペプチド抗体作製
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ペプチド抗体精製キット マニュアル

�T　用意するもの
エンプティカラム（添付品）
セファローズ（１ｍｌ）に吸着させたペプチド（５ｍｌチューブ内　添付品）

以下のものをご用意ください。
溶媒１：Phosphate Buffer Salin 1X
溶媒２：PBS 1X with 0.1%Tween20
溶媒３：Glycine 0.1M pH2
溶媒４：Tris 1M pH8
溶媒５：PBS 1X with azide 0.02%

�U　方法
―１　血清から抗体精製
血清を溶媒１で１／２に希釈します。
５ｍｌチューブ中のセファローズと希釈した血清を混合して１時間３７℃で
振とうさせた後　４℃で８時間置く。

―２　カラムの準備
セファローズ血清の混合体をエンプティカラムに満たす。
注意　カラムの端が密閉されていることを確認ください。
カラムから液体を落とし吸着しなかった血清はほかのチューブに保存してください。
セファローズビーズを溶媒２　１５ｍｌでリンスして続いて溶媒１　３０ｍｌでリンスしてください。
洗浄液の280nmでの吸光を測定して 0.002以上であれば　溶媒１でもう一度洗浄してください。

―３　精製済み抗体の回収のためのチューブの準備
テストチューブラックに　６〜８本の回収チューブを用意してください。
各回収チューブに溶媒４を200ulずつ加えます。

―４　溶出
カラムから溶媒１を取り除く。
カラムに溶媒３を５ｍｌ加えてカラムからの溶出液を１ｍｌずつチューブに回収する。
各チューブの280nmでのOD値を測定する。
抗体の含まれているチューブをプールする。
プールしたものの280nmでのOD値を再度測定する。
精製抗体の濃度は次の公式で計算できます。

濃度（ug/ml）= OD (1/LP) ×0.69× 1000
　　　ＬＰ：　光路長（ｃｍ）

―５　カラムの再生
カラムを溶媒５　１０ｍｌで洗浄する。
洗浄液が　pH７であることを確認する。
カラムは　４℃で保存する。（セファローズは　溶媒１の１／１０希釈液とともにチューブに保管する）